若降温速率较慢，则溶液形成的冰晶比较粗大，冰界面由下向上推进的速度较慢，溶液中溶质迁移时间，溶液表面冻结层溶质的积聚也相对密集。因而导致上表层的溶质往往较多，密度较高，

而下底层密度较小，结构疏松。这种分层现象，在骨架差的制品上体现得为，或者底部，或者中间断层，或者顶部突起，或者顶部脱落1层硬壳，不1而足。

为了瓶冻分层的现象，在实践中，有人提倡使用三步法，样品从室温先冷却至样品的初始冻结温度;然后停止降温过程，使样品内温度自动平衡，其中的温度梯度;后再降温。

由于此时样品上下部分的温度离结晶温度都较近，故样品在冻结过程中温度梯度相对较小，冰晶生长速度因此而加快。这样，便了预冻速率，解决了溶质聚集在上层的问题。不过，并不是的品种使用了三步法后取得的。