使用高效液相色谱仪的良好习惯？

溶剂纯度与兼容性把控：优先选用色谱纯级溶剂（如甲醇、乙腈），避免使用分析纯溶剂中的杂质污染色谱柱或影响检测基线；配制流动相时，需确认溶剂间的兼容性（如避免强极性溶剂与非极性溶剂混合时产生分层），且严格控制 pH 值（如反相色谱柱通常要求 pH 2-8），超出范围需用缓冲液调节，防止损伤色谱柱固定相。

流动相脱气与过滤：每次配制流动相后，必须通过超声脱气（脱气时间 15-20 分钟）或在线脱气机去除溶解氧，避免气泡进入泵体导致压力波动、基线噪声增大；同时用 0.22μm（有机相用尼龙膜、水相用混合纤维素膜）滤膜过滤流动相，去除微小颗粒杂质，防止堵塞色谱柱入口或单向阀。

色谱柱与进样针检查：查看色谱柱标签，确认与检测方法匹配（如分析极性化合物选用反相色谱柱、分析离子型化合物选用离子交换色谱柱），并检查色谱柱两端接头是否拧紧、柱芯是否有漏液痕迹；进样针需检查针尖是否弯曲、堵塞，若有需更换新针，避免损坏进样阀或导致进样量不准。

设备部件状态确认：检查输液泵的溶剂瓶内液位（需高于泵入口滤头，避免吸入空气），确认溶剂管路无弯折、破损；打开检测器光源（如紫外检测器的氘灯）预热前，查看光源使用时间（通常氘灯寿命为 2000-3000 小时，接近寿命需提前备用）；检查废液桶是否已满，及时清空避免废液溢出污染设备。

梯度洗脱平稳过渡：若采用梯度洗脱程序，需设置合理的梯度变化速率（如有机相比例每分钟变化不超过 10%），避免溶剂组成骤变导致色谱柱压力剧烈波动，损伤固定相；梯度结束后，需用初始流动相平衡色谱柱（平衡时间为柱体积的 5-10 倍），确保下次检测时色谱柱状态一致。

进样操作精准规范：手动进样时，需先用样品溶液润洗进样针 3-5 次（每次润洗体积为针容量的 1/3），避免样品残留导致交叉污染；进样时动作缓慢平稳，将针芯推至 “定量环满量程" 位置后停留 1-2 秒再拔出，确保进样量准确；自动进样时，需确认样品瓶内样品量充足（高于进样针取样高度），并检查样品盘是否放置平稳，避免进样针碰撞样品瓶。

压力与基线监控：运行过程中每 10 分钟记录一次输液泵压力，若压力突然升高（超过正常压力 20%），可能是色谱柱堵塞或管路堵塞，需立即停止运行，用纯溶剂反向冲洗色谱柱或检查管路；若基线出现异常漂移（如紫外检测器基线漂移超过 0.005AU/h），需检查流动相是否污染、检测器光源是否稳定，或环境温度是否波动（需控制实验室温度在 20-25℃，湿度 40%-60%）。

样品与数据管理：检测过程中，样品瓶需按编号有序摆放，避免混淆；每批样品需随行空白样品与标准品，用于验证检测系统适用性（如标准品峰形对称、分离度≥1.5）；实时查看色谱图，若出现峰形拖尾、分裂等情况，需暂停检测，排查是否因色谱柱污染（需用强溶剂冲洗）或流动相 pH 值不当导致。

色谱柱针对性清洗：根据检测样品特性选择清洗溶剂，分析完高浓度样品或含强保留物质（如蛋白质、油脂）后，需用专用清洗溶剂冲洗色谱柱（如反相色谱柱用甲醇 - 水（90:10）冲洗 30 分钟，再用纯甲醇冲洗 20 分钟），去除柱内残留物质，防止固定相老化；长期不用的色谱柱，需用储存溶剂（如反相柱用纯甲醇、正相柱用正己烷）封存，两端用堵头拧紧，避免柱芯受潮或污染。

管路与进样阀清洁：关机后用纯溶剂（如甲醇）冲洗输液泵管路与进样阀（冲洗体积为管路体积的 3-5 倍），去除残留流动相，防止盐类物质结晶堵塞管路；进样阀需切换至 “清洗" 模式，用溶剂反复冲洗进样口，避免样品残留腐蚀阀体。

检测器与软件操作：关闭检测器光源前，需先关闭检测软件中的数据采集功能，避免光源突然熄灭导致软件报错；关闭输液泵后，需将溶剂管路从溶剂瓶中取出，用压缩空气吹净管路内残留溶剂，再将管路放入纯甲醇中（防止管路内水分结冰或滋生微生物）。

设备外部与环境清洁：用无尘布擦拭设备外壳，去除溶剂残留与粉尘；清理进样区台面，将进样针、样品瓶等耗材分类收纳；检查实验室通风系统是否正常，确保溶剂挥发气体及时排出，保护操作人员健康与设备部件。

短期维护（每周 1 次）：清洗在线脱气机的过滤器，检查输液泵单向阀是否堵塞（若压力波动大，可拆下单向阀用甲醇超声清洗）；校准进样针的进样量（用天平称量进样体积，误差需控制在 ±1% 以内）。

长期维护（每月 1 次）：更换输液泵的密封垫（避免密封老化导致漏液），检查色谱柱柱效（用标准品测定理论塔板数，若柱效下降超过 30% 需更换色谱柱）；清洁检测器流通池（用甲醇超声清洗，去除池内残留污染物，恢复检测灵敏度）。

操作与维护记录：建立设备使用档案，详细记录每次使用的检测项目、样品信息、流动相组成、色谱柱型号、关键参数（压力、温度、基线噪声）等；每次维护后记录维护内容、更换部件型号（如氘灯、密封垫）、维护人员与时间，便于追溯设备故障原因与维护周期。

耗材与备件管理：定期盘点色谱柱、溶剂、进样针等耗材库存，确保常用耗材有备用（如备用色谱柱、0.22μm 滤膜）；建立备件清单，标注关键部件（如氘灯、单向阀）的更换周期与供应商信息，避免设备故障时因缺少备件导致停机。